Q1 ウイルスベクターについて教えてください

脳科学辞典のウイルスベクターや遺伝子導入の項をご参照ください。

Q2 AAVベクターの保存方法は？

使用量ごとに分注して、－80℃での保存することをお勧めします。ただし、AAVベクターは比較的物理的に安定であり、少なくとも平井グループで作成したAAV2/9やAAV-PHP.eBに関しては、4℃で数週間から数ヶ月安定であることを確認しています。しかしながら、長期間の冷蔵庫での保存の場合、感染能が徐々に落ちていく可能性は否定できませんので、－80℃での保存をお勧めします。

Q3 どのようにウイルス溶液を使用したらいいでしょうか？

精製済みかつD-PBS(-)に置換済みですので、任意の濃度(vg/ml)にPBS等で希釈後、そのまま in vitro および in vivo 実験にお使いいただけます。

Q4 AAVベクターの不活化処理はどのように行えばいいでしょうか？

AAVベクターはエンベロープを持たないウイルスベクターであるため、アルコール（70％エタノール等）では不活化できません。必ず、次亜塩素酸溶液（ハイター等）による処理またはオートクレーブ処理を行ってから廃棄してください。

Q5 AAVベクターを使用した文献はありますか？

群馬大学大学院医学系研究科脳神経再生医学分野（平井研）では、AAVベクターを利用した数多くの文献を発表しています。一例として、以下の文献^1-3をご参照ください。

1. Huda et al., (2014) Distinct transduction profiles in the CNS via three injection routes of AAV9 and the application to generation of a neurodegenerative mouse model.
Molecular Therapy-Methods & Clinical Development, 1:14032.
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2329050116300997?via%3Dihub
2. Matsuzaki et al., (2016) Transduction Profile of the Marmoset Central Nervous System Using Adeno-Associated Virus Serotype 9 Vectors.
Molecular Neurobiology, 54(3):1745-1758.
https://link.springer.com/article/10.1007%2Fs12035-016-9777-6
3. Shinohara et al., (2018) Effects of Neutralizing Antibody Production on AAV-PHP.B-Mediated Transduction of the Mouse Central Nervous System.
Mol Neurobiol. 2018 Oct 5.
https://link.springer.com/article/10.1007%2Fs12035-018-1366-4
4．Matsuzaki et al., (2019) Neurotropic Properties of AAV-PHP.B Are Shared among Diverse Inbred Strains of Mice.
Mol Ther. 2019 Apr 10;27(4):700-704. Epub 2019 Feb 28.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/30842039
5. Yasui et al., (2020) Global knockdown of retinoid-related orphan receptor α in mature Purkinje cells reveals aberrant cerebellar phenotypes of spinocerebellar ataxia.
Neuroscience. 2020 Apr. doi: 10.1016/j.neuroscience.2020.04.004.
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32278059/
6. Hoshino et al., (2021) GABAergic neuron-specific whole-brain transduction by AAV-PHP.B incorporated with a new GAD65 promoter.
Mol Brain. 2021 Feb 15;14(1):33.
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33588899/
7. Radhiyanti et al., (2021) Comparative study of neuron-specific promoters in mouse brain transduced by intravenously administered AAV-PHP.eB.
Neurosci Lett. 2021 Jun 21;756:135956.
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33989730/

Q6 AAV-PHP.eBとは？

マウスの血液脳関門（BBB）を高効率に透過できる性質を持つため、静脈投与により脳全域に遺伝子導入が可能なAAVベクターであるPHP.B⁴の改良版⁵です。詳しくは以下の論文をご参照ください。また、BALB/cではBBBを透過できない⁶ため、使用するマウスの系統にお気を付け下さい。さらに、マーモセットにおいては、PHP.BのBBB透過効率はAAV2/9と同程度であり、ほとんど脳内に移行しません⁷。

4．Deverman et al., (2016) Cre-dependent selection yields AAV variants for widespread gene transfer to the adult brain.
Nat Biotech, 34 (2):204-209.
https://www.nature.com/articles/nbt.3440
5. Chan et al., (2017) Engineered AAVs for efficient noninvasive gene delivery to the central and peripheral nervous systems.
Nat Neurosci, 20:1172-1179.
https://www.nature.com/articles/nn.4593
6．Hordeaux et al., (2018) The Neurotropic Properties of AAV-PHP.B Are Limited to C57BL/6J Mice.
Molecular Therapy, 26(3):664-668.
https://doi.org/10.1016/j.ymthe.2018.01.018
7．Matsuzaki et al., (2018) Intravenous administration of the adeno-associated virus-PHP.B capsid fails to upregulate transduction efficiency in the marmoset brain.
Neurosci Lett, 665:182-188.
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0304394017309588?via%3Dihub

Q7 AAV2/9とはAAV9とは異なるのですか？

基本的に同じものと考えて構いません。AAVベクターの血清型を表記する場合、慣例的に AAV?/?と記載します。最初の「?」はReplicaseの血清型、2番目の「?」にCapsidの血清型を記載します。平井グループで作成するAAV9は、AAV2由来のReplicaseと、AAV9由来のCapsidを含むパッケージングプラスミドを用いているため、AAV2/9と表記しています。また、研究に用いられる多くのAAV用発現プラスミド（pAAV-xxx）は、AAV2由来のITRを持っているため、AAV2由来のReplicaseを用いてパッケージングすることにより、効率的にAAV粒子を産生できます。

Q8 AAVベクターの精製方法を教えて下さい。

群馬大学で作製するAAVベクターは、培地中に放出させたAAVベクターのみを回収し、iodixanolを用いた超遠心法で作製しています。詳しいプロトコールは以下の文献をご参照下さい。
Konno & Hirai (2020) Efficient whole brain transduction by systemic infusion of minimally purified AAV-PHP.eB.
Journal of Neuroscience Methods, 2020. 346: p. 108914.
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32810474/
本論文は、簡易精製法に関する論文ですが、ポジティブコントロールとして、超遠心での精製法も載せてあります。平井グループから配布したAAVベクター使用した結果を論文化する場合、上記論文を引用して下さい。
例文： AAV vectors were produced using the ultracentrifugation method described in a previous paper (Konno & Hirai).